基因表达

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 原核表达

服务概述

目前本实验室主要采用的原核表达系统的表达载体为pET载体系列与pGEX载体系列，表达菌株为BL21(DE3)系列菌株和Rosseta系列菌株，如有特殊需要，我们还单独可以提供特殊菌株与载体。

样品要求

1.目的基因序列信息，

2.基因片段—亚克隆模板（包括：菌液、质粒、PCR扩增产物、RT-PCR扩增产物、从其他质粒上酶切得到的DNA片段等）及检测结果和背景资料；

3.待表达基因已尝试表达的方法与结果(若有)；

4.待表达基因的特殊要求（带何种标签及标签的位置）；

5.纯化方式；

6.最终表达量等。

服务流程

 1、若客户提供的基因片段中已有合适限制性内切酶位点，则直接酶切并回收其片段；若无，则以客户提供的基因片段为模板，设计并合成含有相关限制性内切酶位点的引物，用高保真性能的DNA聚合酶扩增，然后再酶切并回收其片段。

2、构建重组载体质粒：把目的基因片段与相同酶切后的表达载体连接，转化大肠杆菌克隆菌株感受态细胞，筛选转化子，测序鉴定。

3、把重组载体质粒转化至BL21(DE3)或Rosseta系列表达菌株中，筛选转化子。

4、重组表达质粒在表达菌株中的诱导表达。

5、表达产物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。

6、表达产物的纯化（按照柱材说明书操作）。

7、纯化产物免疫学活性的鉴定（ELISA 或WESTERN BLOTTING检测）

完成时间

    1~2月。

最终产品

完整实验报告；含有目的基因的表达载体质粒以及对应的菌株。纯化的目的蛋白。

服务费用

根据研究基因的国内外研究情况而定。基因背景不清晰的则询价。另外，由于某些基因的表达产物会抑制宿主菌生长，我们不保证每一个基因都能够高效表达。

 酵母真核表达

服务概述

目前本实验室主要采用酵母表达体系的载体为pPIC9k与pPIC3.5k，表达菌株为毕赤酵母GS115与KM71，如有特殊需要，我们还单独可以提供特殊菌株与载体。

样品要求

1.目的基因序列信息，

2.基因片段—亚克隆模板（包括：菌液、质粒、PCR扩增产物、RT-PCR扩增产物、从其他质粒上酶切得到的DNA片段等）及检测结果和背景资料；

3.待表达基因已尝试表达的方法与结果(若有)；

4.待表达基因的特殊要求（带何种标签及标签的位置）；

5.纯化方式；

6.最终表达量等。

服务流程

1、 获得含合适限制性内切酶位点的目的基因片段（参见原核表达项目下）。

2、构建重组载体质粒：把目的基因片段与相同酶切后的表达载体连接，转化大肠杆菌克隆菌株感受态细胞，筛选转化子，测序鉴定。

3、把重组载体质粒转化至BL21(DE3)或Rosseta系列表达菌株中，筛选转化子。

4、重组表达质粒在表达菌株中的诱导表达。

5、表达产物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。

6、表达产物的纯化（按照柱材说明书操作）。

7、纯化产物免疫学活性的鉴定（ELISA 或WESTERN BLOTTING检测）

完成时间

    2~4月。

最终产品

完整实验报告；含有目的基因的表达载体质粒以及对应的菌株。纯化的目的蛋白。

服务费用

根据研究基因的国内外研究情况而定。基因背景不清晰的则询价。另外，由于某些基因的表达产物会抑制宿主菌生长，我们不保证每一个基因都能够高效表达。

 哺乳细胞真核表达

 服务概述

随着愈来愈多的治疗疾病的药物蛋白质被发现，高纯度活性蛋白的获得具有更大的意义。通过各种真核表达系统生产外源蛋白是目前研究的热点领域，也是今后蛋白质工程技术一个重要的研究方向。它不仅可以表达克隆的cDNA，而且还可以表达真核基因组DNA，表达的蛋白质可以被适当地修饰(糖基化等)。我公司选用适合实验（科研项目）需要的真核表达系统和合适的表达载体为您提供优质的服务。

样品要求

1.目的基因序列信息，

2.基因片段—亚克隆模板（包括：菌液、质粒、PCR扩增产物、RT-PCR扩增产物、从其他质粒上酶切得到的DNA片段等）及检测结果和背景资料；

3.待表达基因的特殊要求（带何种标签及标签的位置）；

4.纯化方式；

5.最终表达量等。

服务流程

    哺乳动物细胞的瞬时表达：

1、获得含合适限制性内切酶位点的目的基因片段：合成基因或者客户提供(cDNA、基因组DNA、质粒等)；

2、构建表达载体；

3、瞬时转染CHO、HEK293等哺乳动物细胞；

4、Western blot检测。

    哺乳动物细胞的稳定表达：

1、获得含合适限制性内切酶位点的目的基因片段：合成基因或者客户提供 (cDNA、基因组DNA、质粒等)；

2、构建表达载体；

3、稳定转化细胞；

4、Western blot检测；

5、筛选稳定表达细胞株。

完成时间

    2~4月。

最终产品

完整实验报告；含有目的基因的表达载体质粒，稳定表达的细胞株。纯化的目的蛋白。

服务费用

根据研究基因的国内外研究情况而定。基因背景不清晰的则询价。另外，由于某些基因的表达产物会抑制细胞株生长，我们不保证每一个基因都能够高效表达。